Applicazione di nuove metodologie alla diagnostica delle infezioni da HPV: valutazione della performance clinica dell’HPV OncoTect rispetto al Nuclisens EasyQ e del suo potenziale ruolo nell’individuazione di lesioni preneoplastiche della cervice uterina

Abstract

Nell’infezione da HPV ad alto rischio (HR), l’espressione delle oncoproteine E6 ed E7, causano la degradazione della p53 e l’inattivazione di pRb e, di conseguenza, la progressione del ciclo cellulare verso la fase S; entrambe promuovono la conversione verso un fenotipo maligno o il mantenimento dello stesso. Obiettivo principale di questo studio e argomento di questa tesi, è stata, quindi, la valutazione della performance clinica dell’HPV OncoTect® rispetto al NucliSENS EasyQ (BioMerieux, Italia) che è il test ufficialmente in uso presso il nostro laboratorio per la rilevazione dell’mRNA delle oncoproteine virali su campioni cervico-vaginali in fase liquida. In questo studio sono state arruolate 173 pazienti precedentemente risultate positive all’esame del DNA e/o al pap-test e che si riteneva opportuno sottoporre all’esame dell’mRNA.. I campioni prelevati da tutte le pazienti arruolate sono stati, quindi, analizzati sia mediante il test NucliSENS EasyQ che mediante il test OncoTect; inoltre 87/173 pazienti sono state inviate all’ambulatorio di ginecologia per effettuare la colposcopia e la valutazione istologica come previsto dai protocolli clinici di screening. Sulla base dei risultati citologici ottenuti dal pap-test, l’mRNA è risultato positivo con il test OncoTect nel 25% dei campioni negativi, nel 40% degli ASCUS, nel 48% degli LSIL e nell’80% degli HSIL. I corrispettivi valori ottenuti con il test NucliSENS EasyQ sono stati 42, 60, 74 e 90%. Sulla base dei risultati istologici, la sensibilità dell’OncoTect rispetto al NucliSENS EasyQ è stata rispettivamente del 20% vs 54% nei campioni negativi, 45% vs 69% nei CIN1 e 74% vs 87% nei CIN2+. Il calcolo della specificità in un sottogruppo di campioni CIN2+ ha evidenziato una specificità più elevata per l’OncoTect (69%) rispetto al NucliSENS EasyQ (36%). In conclusione, il metodo HPV Onco Tect è risultato maggiormente specifico rispetto al NucliSENS EasyQ nel distinguere pazienti con lesioni CIN2+. Questi risultati preliminari indicano che l’HPV Onco Tect è un metodo molto interessante sia per la diagnosi precoce di un’infezione persistente da HPV che per la valutazione delle lesioni preneoplastiche della cervice uterina.

In high risk HPVs the expression of the oncoprotein E6 causes the degradation of p53, while E7 inactives the Retinoblastoma protein pRb and causes progression to S phase of cell cycle, both sustaining the conversion to and the maintenance of malignancy. The aim of this study was to compare the performance in the detection of the E6 and E7 mRNA expression of high risk HPV, using the NucliSENS EasyQ test (bioMerieux), a RT-PCR based method, or HPV OncoTect (IncellDx) a test based on the flow cytometry-FISH method. Moreover, we investigated the potential role, for the detection of high grade lesion, of the HPV OncoTect compared to pap smears in an effort to improve cervical cancer screening. We enrolled 173 patients previously tested positive for hrHPV DNA and/or pap smear and referred for evaluation by means of the NucliSENS EasyQ test. All patients included in the study were tested with OncoTect and 87 out of 173 underwent a colposcopy and histological evaluation according to clinical protocol. Stratified by cytological grades, the mRNA testing with OncoTect displayed a reactivity of 25% in negative samples, 40% in ASCUS, 48% in LSIL and 80% in HSIL. The corresponding figures for NuciliSENS EasyQ assay were 42, 60, 74 and 90%, respectively. Histology analysis revealed that the sensitivity of OncoTect compared to NucliSENS EasyQ was with normal specimens 20% versus 54%, with CIN1 45% versus 69% and with CIN2+ 74% versus 87%, respectively. Higher specificity was observed when analysing CIN2+ samples with OncoTect (69%) compared to NucliSENS EasyQ (36%). In conclusion, HPV E6/E7 mRNA detected with flow cytometry is more specific than NucliSENS EasyQ in identifying women with CIN2+ but has a lower sensitivity. HPV OncoTect is a promising tool for early prediction of persistent HPV infection and seems to be an interesting method to evaluate the preneoplastic lesions of the cervix and improve cancer screening.