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http://hdl.handle.net/2067/1199
Title: | Reazioni cellulo-mediate in vitro e in vivo nella spigola (Dicentrarchus labrax) | Other Titles: | Cell mediated reactions in vitro and in vivo in sea bass (Dicentrarchus labrax) | Authors: | Zarletti, Gianpaolo | Keywords: | Spigola;Sistema immunitario;Immunomodulazione;Sea bass;Immune system;Immunomodulation;BIO/11 | Issue Date: | 16-Mar-2010 | Publisher: | Università degli studi della Tuscia - Viterbo | Series/Report no.: | Tesi di dottorato di ricerca. 21. ciclo | Abstract: | Il lavoro sperimentale effettuato in questa tesi di dottorato è consistito nello studio dell’attività di leucociti coinvolte in reazioni allogeniche, xeno geniche, di immunomodulazione mediante pratiche di vaccinazione, studio dell’espressione genica e produzione di un anticorpo anti CD8α. Nella prima fase sperimentale sono state studiate le reazioni di leucociti di sangue periferico (PBL) “in vitro” in risposta a stimolo allogenico derivante da PBL inattivati mediante irradiazione con raggi X nel teleosteo Dicentrarchus labrax (spigola). I risultati ottenuti mostrano un marcato incremento del numero dei linfociti T dopo 2 settimane di incubazione in reazioni unidirezionali di leucociti mescolati (MLR: mixed leukocyte reaction). Viceversa i linfociti B non sembrano essere coinvolti nella MLR in quanto i valori ottenuti sono paragonabili ai valori ottenuti dai PBL di controllo mantenuti in coltura senza alcuno stimolo. La proliferazione dei linfociti T è stata anche confermata mediante RT-PCR attraverso l’analisi dell’espressione dell’ mRNA per il recettore dei linfociti T (TCR: T-cell receptor β). Per contro è stato osservato un significativo decremento della proliferazione dei linfociti T mediante l’aggiunta di 5 μg/ml di ciclosporina A (CsA) alle colture di MLR. I leucociti prelevati dalle colture di MLR hanno mostrato un sensibile aumento dell’ attività citotossica rispetto ai campioni di controllo, questo dato suggerisce la presenza ed il coinvolgimento di linfociti citotossici (CTL) nelle reazioni di MLR. L’attivazione cellulare dei PBL in reazioni di MLR a 2 settimane di incubazione è stata determinata mediante l’analisi della mobilizzazione intracellulare di Ca2+ anticorpo-indotta misurata con Fura-2 AM. Con questa metodica si è osservato un aumento della mobilizzazione di Ca2+ intracellulare negli MLR mentre è diminuita con la presenza di CsA. Nella seconda fase sperimentale, invece, sono state studiate reazioni di citotossicità verso bersagli xenogenici e l’immunomodulazione derivante da vaccinazione. I risultati mostrano un coinvolgimento di linfociti T e B e per quanto riguarda i pesci sottoposti a vaccinazione si evidenzia una notevole produzione di immunoglobuline specifiche, ciò è stato anche evidenziato mediante lo studio dell’espressione genica dei geni coinvolti in tali reazioni. Mediante esperimenti di Real-time PCR sono stati studiati alcuni geni del sistema immunitario in vari organi emopoietici quali Timo, intestino (GUT), rene cefalico (HK), milza (Spleen) e sangue periferico (PBL). La scelta di effettuare indagini anche nell'intestino è maturata dal fatto che esso è il distratto anatomico in cui si denota una predominante espressione di geni associati ai linfociti T. I risultati mostrano una notevole presenza di geni correlati a cellule T nel timo e nell’intestino; ciò fa pensare che il sistema immunitario acquisito possa aver avuto ed avere importanti correlazioni con il sistema digerente. Dati preliminari ottenuti nel nostro laboratorio hanno dimostrato che che la popolazione T del GALT contiene cellule CD8α+, TCRγ+ e ciò suggerisce una similarità con il fenotipo cellulare IELs nei mammiferi. Il lavoro effettuato durante la tesi rappresenta una determinazione diretta e quantitativa di alcune attività delle cellule T e B “in vitro” in una specie di teleosteo. I dati ottenuti chiariscono per la prima volta in un modello piscino alcune attività cellulari legate alle risposte immunitarie e suggeriscono meccanismi conservati nell'evoluzione dei vertebrati. |
Description: | Dottorato di ricerca in Genetica e biologia cellulare |
URI: | http://hdl.handle.net/2067/1199 |
Appears in Collections: | Archivio delle tesi di dottorato di ricerca |
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